mRNA Cap 2′-O-甲基轉移酶（50U/μL）說明書

產品描述

mRNA Cap2氧甲基轉移酶（mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase）是一種來自于牛痘病毒的重組蛋白。該酶可以在RNA的5′末端緊挨帽結構的第一個核苷酸的2′-O位置處添加一個甲基基團。該酶利用SAM作為甲基供體來甲基化加帽RNA，從而形成Cap1結構。Cap1結構能增強mRNA的翻譯效率，因此可有助于改善mRNA轉染和顯微注射實驗中的表達。該酶需要有m7GpppN即7-甲基鳥苷帽結構的RNA作為底物。

產品性質來源：攜帶牛痘病毒2'-O-甲基轉移酶基因的E. coli分子量：82 kDa純度：≥95%比活：50 U/μL比活單位定義：在 37℃下1 h內將10 pmol 80 nt 的帶帽RNA轉錄物甲基化所需要的酶量定義為1個活性單位存儲緩沖液：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% TritonX-100，50%甘油，pH 8.0 產品組分

產品應用【Uncapped RNA 一步加帽法 】適用于10 μg以內 uncapped RNA（≥100 nt）的加帽反應，反應體系20 μL，且可根據實驗需要放大。1. 取10 μg RNA，用RNase free water將適量RNA稀釋至14 μL；2. 將RNA置于65℃加熱5 min，結束后冰上放置5 min；3. 按照右側表格依次加入各組分；4. 37℃反應60 min；5. RNA加帽完成，可進行后續(xù)實驗。

【 Cap 0-RNA 的甲基化反應 】適用于10 μg以內 Cap 0-RNA（≥100 nt）的甲基化反應，反應體系20 μL，且可根據實驗需要放大。1. 用RNase Free Water將適量RNA稀釋至15 μL；2. 將RNA置于65℃加熱5 min，結束后冰上放置5 min；3. 按照右側表格依次加入各組分；4. 37℃孵育60 min；5. RNA加帽完成，可進行后續(xù)實驗。

注意事項： （1）用于加帽反應的RNA在使用前應進行純化并溶解于RNase free water 。溶液中不能含有EDTA和鹽。（2）加帽酶反應前加熱RNA可以去除轉錄產物5′的二級結構。如果轉錄產物的5′端結構復雜，可將加熱時間延長至10 min。（3）如果轉錄產物的5′端結構復雜，為提高加帽效率可將反應時間延長至120 min。（4）SAM在室溫下會逐漸降解，SAM降解會導致N 7 甲基化效率降低，會進一步導致加帽失敗，因此需始終放置在冰上。此外，也可以通過體系優(yōu)化適當提高用量以保證加帽反應順利進行。 其他用途可參考上述用途或相關文獻資料進行實驗 運輸和保存方法

運輸條件：藍冰/干冰運輸

保存溫度：-20℃以下保存

避免反復凍融或頻繁暴露于溫度變化中，shou次使用時建議進行分裝。

產品效期：12個月

注意事項

1. 使用時宜存放在冰盒內或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存；

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；

3. 產品僅供研究使用